【緒言】卵胞液（FF）は卵子発育の唯一の環境であり加齢によってその性状は変化する。FF中のmiRNAが卵子発育に重要な役割を果たしている事が示されており，本研究ではFF中のmiRNA頻度に加齢が及ぼす影響と，その変動miRNAが卵子体外発育に及ぼす影響を調べた。【方法】食肉センター由来から採取した若齢（25–50カ月）黒毛和種卵巣の初期胞状卵胞（直径0.5–0.7 mm）から卵子顆粒層細胞複合体（OGCs）を回収し16日間培養した。このOGCsから顆粒層細胞（GCs）と培養液を集めた。また若齢と加齢（140ヶ月以上）ウシ各5頭の卵胞（直径3–6 mm）からFFを回収した。FFと培養液はフィルター（0.2 μｍ）処理後SeraMirで集め，GCsからはNucleoSpin（Takara）でmiRNAを集めsmall-RNAseqに供した。mimic導入の検証は，ターゲット配列を有したpmirGLOvector（Promega）とmimic導入GCsのRNA-seqで行った。miRNAの導入はLipofectamine2000を用いた。【結果および考察】FF中に高濃度で存在するmiRNAのほとんどは，GCsやGCの培養液中に確認できた。FF中ではmiR10b，miR423，miR1246やmiR19b等に月齢間で有意な差が認められた。若齢FFに多いmiR19bを添加に用いた。GCsにmimicを添加するとベクターのターゲット配列に作用することが確認された。さらに添加後の変動遺伝子（RNAseq）ではmiR19bが上流因子として推測され，変動遺伝子に関連付けられるPathwaysはmiR19bのターゲット遺伝子群（Targetscan）と重複していた。mimic添加は，体外発育卵子の直径を有意に増加させ，H4K12アセチル化レベルを上昇させた。また成熟後の核成熟率は高い傾向にあった。本研究ではmiR19bは卵子の発育を支持するが加齢によって卵胞液に占める頻度が減ることが示された。
