抄録
培養7日目のBY-2細胞を植え継ぎ，再び細胞周期に移行させる実験系を用いて，サイクリン依存性キナーゼCDKAの活性制御機構に関する解析を行った．このとき，p13suc1により精製したサイクリン/CDKA複合体は，ヒストンH1およびタバコRbに対してキナーゼ活性を示し，その活性はG1/S移行期に上昇した．Western解析を行ったところ，CDKAの蓄積量は時間と伴に増加し，このキナーゼ活性の上昇はCDKA蓄積量の増加によるものと考えられた．一方で，CDKAのホモログである動物Cdc2の15番目のチロシン（Y15），161番目のスレオニン（T161）に対するリン酸化特異抗体を用いた結果，Y15のリン酸化は検出されなかったのに対して，T161のリン酸化は細胞周期の進行につれて増加した．したがってCAK（CDK activating kinase）が，CDKAのT161をリン酸化することでキナーゼ活性を調節することが示唆された．そこで， T161をアラニンに置換したCDKAにGFPを融合してBY-2細胞で誘導発現させたところ，細胞周期の進行には影響しなかったが，GFP抗体を用いた免疫沈降により変異CDKA活性の顕著な低下がみられた．現在T161のリン酸化がCDKAとサイクリンとの結合の安定性に関与すると想定し，新規の変異CDKAを誘導発現するBY-2細胞の作製をおこなっている．
