抄録
単細胞緑藻のChlamydomonasにおけるRNAi反応の特徴を調べるため、大腸菌由来のスペクチノマイシン耐性遺伝子aadAのmRNAを標的にし、inverted repeat DNAコンストラクトからhairpin RNAを転写させてRNAiを誘起した。強力な遺伝子発現抑止が形質転換直後には見られたが、継代培養後には、標的aadA mRNAの破壊効率が低下し、薬剤耐性能が形質転換前の半分程度にまで復活した細胞が混在した。継代培養後、再び単細胞分離して得たいくつかのコロニーではaadA hairpin RNA蓄積量がコロニー毎に大きく異なった。Inverted repeat領域にはCGメチルが蓄積し、その蓄積量とhairpin RNAの蓄積量には負の相関関係があった。また、脱アセチル化阻害剤の添加により、hairpin RNAの蓄積量が即座に上昇した。以上の事から、ChlamydomonasにおいてRNAi効果が継代培養を通して一定しないのは、inverted repeat配列特異的なCG-methylationが、その領域に付着するヒストン修飾を変化させ、クロマチンの高次構造変化を起こしたことによる、hairpin RNAの転写抑制が主因であることを明らかにした。
