受精卵は胚性ゲノムの活性化により，初期胚発生に必須の遺伝子を発現し，胚発生が進行する。一方，体細胞核移植胚（SCNT胚）においては，特定の遺伝子群について不完全な遺伝子発現活性化が報告されており，SCNT胚の低い発生率の一因と考えられている。そこで当研究室では，胚性ゲノム活性化に際してSCNT胚で発現低下することが知られている遺伝子16個をsiRNAによりマウス受精卵においてノックダウンし，胚発生における役割を調べた。これらの実験を通じて，初期胚発生に重要な候補遺伝子としてGabpb1を同定した。本発表では，Gabpb1ノックアウトマウスを利用し，その機能を探る。方法としてはSCNT胚と体外受精胚（IVF胚）を用いて，免疫染色法によりGabpb1遺伝子の発現を比較した。次に，Gabpb1のノックアウトマウスをCRISPR-Cas9法により作出し，繁殖能を精査した。また，ヘテロ由来卵子と精子を用い体外受精胚（IVF胚）を作出し，初期胚発生における役割を検討した。SCNT胚とIVF胚でGabpb1タンパク質の発現を免疫染色法により比較した結果，SCNT胚における発現減少が確認された。そして，ヘテロ（Gabpb1+/-）個体の交配によりノックアウトマウスの作製を試みた結果，Gabpb1ノックアウトマウスは得られず，胚性致死であることが示唆された。また，Gabpb1+/-由来卵子と精子を用いたIVF胚の発生能力検査により，Gabpb1+/-×Gabpb1+/-のIVF区は野生型コントロール区よりも発生率が有意に低下し，桑実胚で停止した胚が多く確認された。さらに，Gabpb1+/-×Gabpb1+/-のIVFで発生遅延や停止が確認された胚の免疫染色を行うとGabpb1タンパク質の減少が確認された。そして，Single embryo RNA-seqを行い，ノックアウト胚において異常発現を示す遺伝子群の同定を試み，Gabpb1ノックアウトマウスが胚性致死となる原因について知見を得るよう実験を進めている。
