抄録
我々は、リノレン酸を合成する小胞体局在型ω-3脂肪酸不飽和化酵素（NtFAD3）のcDNAをタバコに導入して形質転換植物を作出した。しかし、その中に、野生株よりリノレン酸含量の少ない個体が見つかった。その個体について、ノーザン解析を行ったところ、mRNAの存在は確認できており、転写抑制型サイレンシング（TGS）による発現抑制ではなく、転写後抑制型ジーンサイレンシング（PTGS）様の現象によりNtFAD3の発現が抑制されていると考えた。PTGSと相関性のある現象として、導入遺伝子のコーディング領域のメチル化が多く報告されている。野生株（WT）、PTGSを起こしている株（S44株）、NtFAD3遺伝子を過剰発現している株（S24株）の葉からゲノムDNAを抽出し、メチル化感受性制限酵素処理とPCR法を用いて、メチル化解析を行った。まず、メチル化感受性制限酵素を用いて制限酵素処理を行い、続いて、内在性NtFAD3と導入遺伝子それぞれに対して特異的なプライマーを設計し、PCR法により目的領域が増幅するか確認した。その結果、導入遺伝子においては、S44株では、強いメチル化が確認され、S24株でもS44株ほどではないがメチル化が確認された。そして、内在性NtFAD3遺伝子については現在、検討中である。又、DNAのメチル化シトシンの分布・出現頻度を調べるため、bisulfite処理を用いた解析により更に詳細検討を加えている。
