抄録
我々はNiのファイトレメディエーションを可能にする新しい遺伝子組み換え作物の作出を目指して、植物細胞レベルのNi耐性と集積のメカニズムについて研究を行ってきた。これまでに、タバコBY-2細胞からNi耐性変異株（NIT細胞）を確立し、そのNi耐性機構に細胞内の有機酸やヒスチジン（His）がキレーターとして関与し、また細胞内のNiが液胞へ隔離されていることを示してきた。これらを踏まえNIT細胞から高純度の無傷液胞を単離して液胞内成分を分析した。Niとクエン酸の細胞内分布は、どちらも液胞内にほぼ100％が局在していた。一方、リンゴ酸はNi無処理では全体の95％以上が液胞に局在するものの、Ni処理によって85％まで減少した。Hisは全体の約60%がNIT細胞の液胞内に局在した。Niやこれらキレート物質が液胞内に多量に存在することから、Niの液胞への効率的な輸送にキレート化が関与する可能性が示唆された。そこで、無傷液胞から再構成した液胞膜小胞を使って、液胞膜のNi輸送能を測定することにした。Ni輸送速度の測定には生体膜非透過性のZn・Ni特異的蛍光プローブであるNewport Green DCFニカリウム塩を用いた。あらかじめpH勾配を形成させた液胞膜小胞を用いて、Ni2+、クエン酸―Ni、His―Niなどの輸送速度を測定した結果について報告する。
