アユ冷水病不活化注射ワクチンについて, 市販のオイルバントの添加効果を調べた。 各ワクチンでアユ稚魚を免疫し4週間後に攻撃して有効性を調べたところ, 両バント無添加ワクチンに比べて有意に高い有効性を示した。 また, 免疫後の血中抗体価は, バント無添加ワクチン免疫群に比べて有意に高かった。 これらの結果から, オイルバント添加は冷水病ワクチンの有効性の向上に役立つと考えられた。

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In Japan it has been generally believed that vaccination is not available for diabetic patients.
However, rehabilitation of diabetics is a goal of treatment of diabetes, therefore diabetics should be vaccinated to prevent infectious diseases.
In this study 121 diabetics were subjected for vaccination of Japanese encephalitis or influenza.
Only slight side effects caused by vaccination were shown in these diabetics, and there was no significant difference between nondiabetics and diabetics conceerning side effects of vaccination.
It was also proved in this study that the antibody titer in diabetics became as high as in non-diabetics after vaccination.
As a conclusion it should be pointed out that diabetic patients are able to receive vaccination without any dangerous side effects and that the proper effect of vactination is enough satisfactory in diabetics.

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バントデータベースプロジェクトでは、各種バントを投与した動物の網羅的遺伝子発現情報を取得解析したデータベースを構築している。バントとは抗原とともに投与することで、抗原に対する免疫原性を増強、加速、延長する免疫増強製剤の呼称である。しかし、これまでバント自体の作用メカニズムについては、明らかではない部分が大きかった。そこで、バント単体を投与したラットの脾臓、肝臓等の網羅的遺伝子発現情報を取得することによって、バントの副作用や毒性および作用メカニズムを探索、評価することを目指している。一方、これまでトキシコゲノミクスプロジェクトでは、薬剤を投与したラット肝臓や腎臓の遺伝子発現情報を用いた毒性予測モデルを構築してきた。これら毒性予測モデルにバント投与の遺伝子発現情報を適用することによって、バント単体の安全性や毒性、作用メカニズムを評価できる可能性がある。本報告では上記毒性予測モデルに改良を加え、外部データによって再評価したモデルと、その予測モデルにバント投与の遺伝子発現情報を適用した例について紹介する。

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　「よく効く」ワクチンには、必ずバント、もしくは内因性のバント成分が含まれており、宿主細胞に存在する自然免疫受容体によって認識され、その後の獲得免疫が誘導されることが明らかになってきており、バント（因子）の分子メカニズムの免疫学的、細胞生物学的な理解が飛躍的に進歩しつつある。2011年度のノーベル医学生理学賞が、バントの作用機序に関する自然免疫や樹状細胞研究に授与されたこともあり、基礎研究の裾野も広がってきている。2014年のKeystone Symposiaでは「The Modes of Action of Vaccine Adjuvants」という題目の会が開かれる予定である。また、バントが必要とされるワクチンの臨床応用の対象は感染症の枠を超え、がん、アレルギー、アルツハイマー病など非感染性疾患に広がっており、その開発は世界的に競争が増している。
　一方で、バントを含むワクチンの副作用が問題になっている。このような状況において、ワクチンやバントの有効性や副作用の評価方法、指標（バイオマーカー）の構築が切望されている。　我々は、各種バントによる動物実験やヒトのサンプルを網羅的に解析した「バントデータベース」を構築する準備を進めている。本研究では日本が「安全な」バント開発研究で世界のトップに立つために、バントの評価方法の指標 (バイオマーカー)の同定を目的としたバントデータベースの構築、および新規バント開発を行っている。これらのトランスレーショナルリサーチ、とくにマイクロＲＮＡによるワクチンの副作用バイオマーカーの可能性を示唆する知見を発表したい。

＜最近の著書＞
“Biological DNA Sensor” Edited by Ken Ishii and Choon Kit Tang Elsevier
“Nucleic Acids in Innate Immunity”Edited by Ishii KJ and Akira S　CRC press
「バント開発研究の新展開」石井健、山西弘一編、CMC出版　２０１１

＜最近の代表論文＞
　1) Kobiyama K et al Nonagonistic Dectin-1 ligand transforms CpG into a multitask nanoparticulate TLR9 agonist PNAS 2014 in press
　2) Desmet C and Ishii KJ Nucleic acid sensing at the interface between innate and adaptive immunity in vaccination Nat Rev Immunol 2012 12(7):479-91
　3) Marichal T, et al DNA released from dying host cells mediates aluminum adjuvant activity. Nat Med. 2011 17(8):996-1002.
　4) Koyama S et al Plasmacytoid dendritic cells delineate immunogenicity of influenza vaccine subtypes. Sci Transl Med. 2(25):25ra24. (2010)
　5) Ishii,K.J. et al. TANK-binding kinase-1 delineates innate and adaptive immune responses to DNA vaccines. Nature 451, 725-729 (2008).

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　バントはワクチンに添加されている免疫増強剤であり、ワクチンの種類によってはなくてはならないものです。現在日本で認可されている主なバントはアルミニウム塩（アラム）であり、安全性が高いバントとして多くのワクチンに添加されています。しかしながら、アラムがどのような作用機序で免疫系を活性化するのかについては不明な点が多く残されています。またアラムのみならず、多くの粒子状物質（尿酸塩結晶やシリカなど）もバントとして働くことが知られていますが、その作用機序も詳細には明らかにされておりません。さらに最近話題になっているPM2.5などの大気中の微細粒子もバント作用を介してアレルギー性炎症などを誘導していると考えられています。
　近年の免疫学の発展により、T細胞やB細胞を主体とする獲得免疫の誘導には、マクロファージや樹状細胞を主体とする自然免疫の活性化が必須であることが明らかにされています。そのためアラムを含めた粒子状物質の多くが何らかの形で自然免疫を活性化すると考えられています。最近になり、バント活性を有する粒子状物質の多くが免疫細胞の細胞死を誘導し、そこから遊離される死細胞由来因子（内因性デンジャーシグナル）が自然免疫の活性化に重要であることが報告されてきています。
　このように、ある種のバントとして機能するのではなく、細胞死を介して内因性のバント（内因性デンジャーシグナル）を誘導する「バント誘導物質」として働くと考えられます。このような観点から毒性研究は医薬品の副作用の研究だけでなく、新規バントの探索／開発という点においても重要であると言えます。本教育講演では、バントによる細胞死やデンジャーシグナルを介した免疫活性化のメカニズムについて私たちの研究成果を含めながら紹介したいと思います。

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　3種類の市販水溶性バント(Montanidae IMS-1311, IMS-1312 and IMS-2212)を用いて, アユ冷水病ホルマリン不活化ワクチンの有効性を検討した。ワクチン投与4週間後に攻撃実験を行ったところ, IMS-1311およびIMS-1312を添加したワクチン区は, バント無添加ワクチン区に比べて累積死亡率が低く, オイルバントに匹敵する添加効果が認められた。水溶性バントに比べて, 残留期間は短かったが, 25μL/尾(1.7g±0.5g)以上の投与では毒性が認められた。

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　新興・再興感染症の発生に際し，新規ワクチンの開発は感染症予防の観点から非常に重要である。しかし，抗原自体の免疫原性が極めて低い場合，免疫賦活化あるいは適切な抗原のデリバリーのために

バントを添加することが求められる。世界的にアルミニウムバントとして承認され，多くの感染症予防ワクチンで使用されているが，これに代わるより安全で有効性の高い新規バントの開発が求められてきた。

　我々は，種々の

バント添加インフルエンザワクチン投与時のグローバルな遺伝子発現解析等により，ワクチン安全性を評価するバイオマーカー(BMs)を同定し，全粒子インフルエンザワクチンを指標として免疫活性および毒性を相対的に数値化することで，バント活性の評価に成功してきた。またこれらのBMsをin vivoのみならず，in vitroでも評価できる系を構築してきた (水上他 2019年度 本学会)。そこで私たちは，同定したBMsを逆利用Reverse Toxicologyし，バントをスクリーニングするBMsとして用いることで，新規バント候補の探索に応用できるのではないかと考えた。

　対象化合物としては，すぐに医薬品として展開できるように，既承認薬や添加剤を用いた。これらの候補化合物をインフルエンザHAワクチン(HAv)と混合し，HAv単体より活性が高いものを

バント賦活能のある化合物とした。また，毒性参照用としてすでに安全性評価に用いられているインフルエンザ全粒子ワクチンとの相対活性を比較することで，安全性の高いバントのスクリーニングが可能となるよう設計した。候補化合物に関しては，BMsに基づき網羅的遺伝子発現データベースから逆に絞り込んだ。まず，in vitroでの評価を行い，BMs発現の認められたものに関し，動物を用いてin vivoの評価を行い，BMsの誘導が認められたものに関しては，免疫実験を行い，抗体産生能を検討した。

　その結果，本BMsを用いることで，新規

バント候補を同定することに成功した。よってReverse Toxicologyにより新規バントをスクリーニングすることが可能であることが実証された。今後は，ハイスループット系の開発を行ない，より規模を拡大して，より効率的に有効性・安全性の高いバント探索が可能か試みる。

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As long as the color reappearance method of RGB or CMYK is used, tone jump is absolutely unavoidable. Additional fluctuation in similar colors of the color to be reproduced utilizing output resolution can contribute to increase of visual effects of resolutions and color reappearances. In addition, it's also effective to reappear by a certain aggregate using resolution. There are a good noise and a bad noise in expressions. Color reappearance capabilities can be improved enough using good noises except monitor devices with low output resolution, even for 8 bits.

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粘膜免疫ワクチンは全身性免疫及び局所粘膜の両者を賦活できることから, 急性中耳炎に代表される上気道感染症予防ワクチンとして大きく期待されている。粘膜免疫ワクチンは抗原と粘膜バントと呼ばれる免疫賦活物質からなり, バントがなければ免疫応答を誘導できない。既知の有効な粘膜バントであるコレラトキシン (CT) は, その毒性のため臨床応用が困難であり, 安全かつ有効な粘膜バントの開発が急務となっている。我々は, 樹状細胞 (DC) を標的とした新しい複合DNAバントの研究・開発を行っている。このバントはマウスにおいて有効な粘膜及び全身免疫応答を誘導したが, さらにその免疫応答を長期間持続させることが明らかとなった。このことから複合DNAバントは長期持続型経鼻ワクチンの開発を大きく前進させるものと考えられる。

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症例は65歳, 女性. 1999年よりHugh-Jones II度の労作時息切れを自覚し, 2000年の健康診断で胸部異常影を指摘された. 11月に当科を紹介受診. 左側肺優位の線維化肺所見に加え肺門, 縦隔, 腋窩リンパ節腫大を認め, ぶどう膜炎の併発, ACE, リゾチームの高値よりサルコイドーシスが疑われたが, 豊胸術の既往がありバント病に伴う間質性肺炎の可能性も考えられた. 気管支鏡検査では確定診断に至らず, 胸腔鏡下肺生検, 傍大動脈リンパ節生検を施行した. 傍大動脈リンパ節に典型的な類上皮細胞肉芽腫を認め, 肺組織所見もサ症の肺病変として矛盾しない所見でありサルコイドーシスと診断した. 胸腔鏡下生検が確定診断に有用であった.

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3種類のオイルバント(ISA-70, フロインド不完全バント(FIA), フロイジド完全バント(FCA))及びリン酸アルミニウムゲル(APG)をモルモットとラットに筋肉内注射し, 注射部位の病理学的変化を比較検討した. 肉眼的に, ISA-70乳剤注射モルモットでは, 注射後2～8週目に注射部位皮下組織の部分的肥厚と筋間結合組織の変色, 所属リンパ節の腫脹が認められた. FIAではISA-70とほぼ同質の変化を示したが, FCAでは2週目以降注射部位の著明な腫脹と硬結が観察された. また, APGでは筋肉内に限局して変色病変が認められた. 組織学的に, オイルバントでは, 72時間目には急性炎症反応が認められ, その後4週目をピークに, オイルシスト形成, マクロファージ, 類上皮細胞の集簇及び線維化が観察された. これらの変化は, モルモット, ラットともほぼ同様で, ISA-70では他のバントに比べ軽度で, 短期間に消退する傾向を示した. ニューカッスル病(ND)ウイルス抗原を含む各バント材料注射例では, 上記変化に加えて著明な小円形細胞(形質細胞, リンパ球)浸潤が認められた. また, ND赤血球凝集抑制抗体は, ISA-70注射例では, FIA注射例とほぼ同様の高い抗体価の推移を示した.

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23種類の界面活性剤を用いてMHのタバコ腋芽抑制作用を指標に界面活性剤のバント作用について検討した.
界面活性剤の化学構造と薬害については一定の関係は得られなかったが, タバコにおいては従来からいわれていたC₈～C₁₂を含む界面活性剤が, 必ずしもつねに高い薬害を示すとはいえないことがわかった. またバント効果はC₁₂およびC_18:1を含む界面活性剤において局かった.
界面活性剤の物性とバント作用については, 界面活性剤の薬害の出ない最高濃度および吸湿性に高い相関関係が認められたが, 表面張力, 接触角, HLB, pHには相関関係は認められなかった. またいくつかの保湿剤にも高いバント効果が認められた.
以上の結果から, 従来の展着剤の効果つまり付着性, 湿展性, 懸垂性, 乳化性などに加えてバント効果を期待する場合には, 高濃度で植物に薬害を与えず, 吸湿性にすぐれた界面活性剤を選ぶことが重要であることがわかった.

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　養殖アユの Pseudomonas plecoglossicida に起因する細菌性出血性腹水病に対するワクチンの開発のため, ホルマリン死菌にオイルバント(MONTANIDE-ISA711 または -ISA763A)を添加した腹腔内注射ワクチンの有効性を検討した。ワクチン接種22日後と52日後に腹腔内注射攻撃試験を行った結果, バント添加注射ワクチン区に高い有効性が認められた。しかし, 少なくとも65日後まで魚体内にバントの残留が確認された。

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ヒト・adjuvant病は,異物を用いた美容外科術後に起こる膠原病様もしくは自己免疫疾患様病態である.自験例,本邦報告例を検討すると, 1965年以前に異物注入法で手術を受けた症例が多く, PSSおよびその関連疾患との関係が深いと考えられた.一方近年海外での報告例が増加しており,これらの多くは1970年以後に,シリコンバッグの充填法で手術を受けている. PSSの頻度が高いということは自験,本邦報告例の結果と一致する.

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バントデータベースプロジェクトでは、各種バントを投与した動物の網羅的遺伝子発現情報を取得解析したデータベースを構築している。バントとは抗原とともに投与することで、抗原に対する免疫原性を増強、加速、延長する免疫増強製剤の呼称である。しかし、これまでバント自体の作用メカニズムについては、明らかではない部分が大きかった。そこで、バント単体を投与したラットの脾臓、肝臓等の網羅的遺伝子発現情報を取得することによって、バントの副作用や毒性および免疫システムへの作用メカニズムを探索、評価することを目指している。
一方、これまでトキシコゲノミクスプロジェクトでは、薬剤を投与したラット肝臓や腎臓の遺伝子発現情報を用いた毒性予測モデルを構築してきたが、免疫調節に関わる薬剤の精度のよい予測モデルは構築されていなかった。本研究ではこれまで開発してきた毒性予測モデルの主な構築方法に改良を加え、Open TG-GATEsデータを用いて免疫抑制化合物予測モデルを構築した。改良した方法によって得られた特徴遺伝子は、自然免疫の初期応答に関わるメカニズムを反映していることが、パスウェイを再構築することにより示唆できた。またモデルの予測結果に偽陽性は少なかった。DrugMatrixを用いた外部データによる予測でも同様の傾向を示すことができた。本報告では上記予測モデルについて紹介する。

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生体は、抗原物質と抗原性補強剤である免疫バントが共存すると免疫担当細胞の活性は増強される。一般に、免疫バントは抗原性増強作用を高めるほど毒性が強くなる傾向があり難点となっている。そこで本研究では、生体適合性のアパタイトのナノ粒子(HA)に、抗原性増強作用はほとんどないが、安全性が高い免疫バントの精製ツベルクリン(PPD)を複合化し、その抗原性増強作用を検討した。その結果、PPD単体あるいはHAにPPDが吸着した状態よりも、PPD-HAの共沈複合体の方がマクロファージ様細胞を活性化した。つまり、PPDのバント活性は、共沈複合化によりその安全性を維持しつつ飛躍的に高まったと考えられる。

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