子葉, 根及びカルスをナースとして用い, ダイコン (品種: 白姫) のプロトプラスト培養を行った. プロトプラストは, 無菌的に発芽させた幼植物体の子葉及び幼葉から酵素処理によって単離した. 酵素処理は, 40rpmで3時間振蘯を行った. その結果, MS培地を用いて子葉, 根をナースとした場合の細胞分裂率はこれまで報告された十字花科作物などの結果とほぼ同じであった. また, 子葉及び根をナースとした場合の細胞分裂率及びコロニー形成率はカルス及び無ナースの場合よりも有意に高い値を示した. さらに, 子葉ナースは根ナースよりも細胞分裂率及びコロニー形成率が高い傾向を示し, カルスナースは無ナースよりも細胞分裂率及びコロニー形成率が高い傾向を示した.
コロニー由来の黄色ないし緑色カルスから, 培養30日後に zeatin 2.0mg/l+kinetin 2.0mg/lのホルモンの組み合わせで13.2%, BA1.0mg/l+kinetin 2.0mg/lのホルモンの組み合わせで18.5%の幼芽が分化した. 同じ zeatin 及びBA濃度と kinetin 濃度1.0及び3.0mg/lの組み合わせでは, 幼芽分化率は10%以下に低下した. このことは, 幼芽形成に有効であるとされている zeatin とBAの効果が kinetin の濃度によって影響されることを示唆している.
本研究の結果は, 作物の中で比較的に困難とされているダイコンのプロトプラスト培養, さらに植物体再生の改良に知見を与えるものである. 今後の課題は, これらの知見を基にして細胞融合, 形質転換植物体の育成を検討することである.

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ニホンスイセンの苗条原基誘導を目的として, 温度25℃, 照度3000luxの連続照明下で傾斜回転培養 (2～4rpm) を行い, 植物ホルモンが茎頂組織の生育に及ぼす影響をみるとともに, 長期培養による苗条原基の誘導を試みた.
培養7週間では, B5液体培地, MS液体培地において, ともにNAA無添加区とNAA0.02mg/l区で茎頂組織が生長し, NAA0.2mg/l区で茎頂組織が肥大した. BAPの0.02～0.2mg/l添加はNAAの作用を促進した. NAA2mg/l以上では柔組織の増殖がみられた. オーキシンとして2,4-Dを用いるとNAAに比べて柔組織の増殖が促進され, サイトカイニンとして4PUを用いるとBAPに比べて茎頂組織の生長が促進され, いずれも苗条原基誘導に不適当と考えられた. NAA0.2mg/l+BAP0.2～2mg/lを添加したMS液体培地で培養開始183日目に苗条原基様の集塊が得られ, この苗条原基から完全な植物体が誘導された.

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本実験は, 挿木繁殖が困難である日本原産野生種クマガワブドウ (Vitis kiusiana Momiyama) のマイクロプロパゲーションを目的として茎頂培養を行ったものである.
茎頂摘出をフェノール物質吸着剤である水溶性のポリビニルピロリドン (PVP) 添加滅菌水中で行うと, 茎頂の褐変防止に有効であった. シュートを生長させるには, 初代培地として1/2 MS液体培地 (ショ糖3%, NAA 0.01mg/l, BA 0.5mg/lを含む) が寒天培地に比べて効果的であった. 0.01～0.1%の不溶性ポリビニルポリピロリドン (PVPP) の寒天培地への添加は, 茎頂の生存およびその後のシュート生長に有効であった. 発根促進には, 寒天培地へのPVPP添加が不可欠であり, IBA 250mg/l (50%エタノールに溶解) でシュートの基部を5秒間浸漬処理した後, ホルモンフリー培地に植付けた場合が発根率, 発根数および根長において最も有効であった.

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アマリリス (Hippectstrum hybridum) 大輪赤花系の球根のりん葉基部切片を用いて, in vitro での子球の増殖条件を検討するとともに, 得られた子球のウイルス保毒検定を行った. りん葉基部の切片に切れ目を入れてNAAとBAを添加した寒天培地で培養し, 得られた子球に十字の切れ目を入れてさらに液体培地で振とう培養する方法により in vitro で効率的に子球を獲得できることがわかった. 得られた子球のウイルス検定の結果, りん葉基部の切片に形成された子球では, キュウリモザイクウイルス (CMV) は98%除去されたが, アマリリスモザイクウイルス (HiMV) の除去率は33%であった. この子球をさらに再培養して得られた新子球のウイルス検定では, CMV, HiMVともに100%のウイルス除去率が得られ, これらの方法による子球の増殖とウイルス無毒株獲得の可能性が示された.

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ヒガンバナ科とユリ科に属する7種の植物のウイルス保毒球根を供試し, りん葉の in vitro 培養による子球形成とウイルス除去効果について検討した. 得られた1次子球からのキュウリモザイクウイルス (CMV) の除去率は Lycoris squamigera など5種の植物では90～100%と高率であった. しかし, Lilium longiflorum (15.4%) Narcissus jonquilla (5.4%) ではCMV除去効果はほとんど認められず, ひも状ウイルスの除去率もいずれの植物でも0%～67.6%と低かった. 子球の大きさ別の保毒検定では子球径が小さいほど除去率が高まる傾向が認められた. 保毒1次子球の2次培養ではウイルス除去率は植物の種類により異なり, L. longiflorum ではCMV除去率は80%に増加した. さらに, DHT (2,4-Dioxohexahydro-1,3,5-triazine) 0.1%添加培地で2次培養を行った場合, ひも状ウイルスに対しては効果は認められなかったが, CMV除去率はN. jonquilla で60%, L. longiflorum で93.3%とさらに高まった.

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ムクゲ (Hibiscus syriacus) の葉切片に binary vector pBI121 (NPT II, GUS) を持つ Agrobacterium tumefaciens LBA404を感染させ形質転換植物体を得た. 0.2mg/l 2, 4-D, 2.0mg/l BA, 50mg/l Kmを含むMS培地上で約28%の葉切片からKm耐性カルスが形成された. カルスを2mg/l 2ip, 0.1mg/l NAA, 50mg/l Kmを含むMS培地に移すことによりシュートが再生した. 0.5mg/l IBA, 25mg/l Kmを含む培地上でシュートから根が発生した. 再生植物体の葉, 茎及び根から, 組織化学的染色法と蛍光測定法の両方法によってGUS活性が検出された. GUS及びNPT IIプローブを用いた Northern hybridization により, 再生植物体が両遺伝子を発現する安定な形質転換体であることが示された.

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Multiple shoots were successfully regenerated via meristematic nodules from inflorescence sections of Rohdea japonica Roth on MS medium supplemented with 10μM BA and 1μM NAA. Shoots with unusual variegation types were obtained from the inflorescence sections.

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寺岡アザミ (Cirsium japonicum DC. cv. Teraoka) の in vitro 増殖を, 0, 0.44および4.4μM BAを含むMS基本培地上で, 茎を縦断して継代培養することで行った. BA添加培地で腋芽の成長の促進がみられ, 16日間隔で2.9倍のシュート増殖率が得られた. この方法で得られたシュートの90%はMS基本培地で発根した. これらは土壌条件下で容易に順化活着し, 温室内で正常に開花した.

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B. rapa 3品種の子葉片からの不定芽形成に最適な培地について検討した. その結果, NAA 1mg/lとBA 2mg/lを含む培地で最も高い不定芽形成率を示すことが判明した. 次に, 60品種の再分化能を評価したところ, 80%以上の不定芽形成率を示す7品種を見出すことができた. アグロバクテリウムの除菌に使用される抗生物質の添加により, いくつかの品種で不定芽形成の減少が見られたが, おそめはその影響を受けなかった. 今後アグロバクテリウムによる遺伝子導入を行う際におそめは最も適した材料であると考えられる.

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