フキ（Petasites japonicus）のクロロゲン酸酸化酵素の精製と性質

抄録

　フキのポリフェノール酸化酵素をアセトン沈殿，イオン交換クロマトグラフィー，疎水クロマトグラフィーおよびゲル濾過により精製した。これらの操作により，本酵素はアセトン分画後の粗酵素液の約115倍に精製され，回収率は11.3％であった。本酵素はPAGEおよびSDS-PAGE上で単一のバンドを示し，電気泳動的に均一であった。精製酵素の分子量はゲル濾過およびSDS-PAGEによりそれぞれ26,000および25,000と推定された。本酵素はクロロゲン酸および（－）-エピカテキンを強く酸化し，クロロゲン酸（pH 4.0，30℃で測定）および（－）-エピカテキン（pH 8.0，30℃で測定）の酸化反応時のミカエリス定数はそれぞれ，0.14 mMおよび0.7 mMであった。本酵素のクロロゲン酸酸化活性（ChO）および（－）-エピカテキン酸化活性（EpO）の最適pHはそれぞれ，4.0および8.0であった。ChO，EpOの両活性ともpH4～9の範囲で，4℃，22時間安定であった。両活性とも最適温度は30℃であり，60℃で10分間の加熱処理に対して安定であった。両活性とも5 mMの_L-アスコルビン酸および_L-システインにより強く阻害された。