逆相クロマトグラフィーで用いられるシリカ系逆相固定相について、以下の事柄を考察した。逆相固定相C18、C30、C8、Phenyl-hexyl、Biphenyl、PFP（pentafluorophenyl）、PFP&C18の水素結合性、疎水性及び立体選択性を調べ、メチル馬尿酸やスチルベン等の分離を比較する事によって、各固定相の分離特性を評価した。シリカ表面へのアルキル基シリル化試薬のモノ・ジ・トリ官能基による結合について、加水分解による劣化を考察した。酸性条件ではトリ官能基による結合が最も加水分解を受け難い事を電子密度の観点から考察した。高背圧でカラムを使用した場合に問題になる摩擦熱について、3種類のシリカ基材について比較した。内部に核をもつ表面多孔性シリカ基材が最も摩擦熱の影響を受けない事が確認された。カラム外容積によるピークの広がりを比較し、カラム外拡散の影響を極力減らした場合には、早く溶出するピーク程、理論段数が高くなる事が確認された。

生体タンパク質の一斉定量定性分析法の一つとして、蛍光誘導体化（fluorogenic derivatization，FD）-LC-MS/MS法が利用される。本手法の分析能力は、LCにおける分離に依存する事から、カラム分離能の向上を目的とし、フェニル修飾モノリスシリカキャピラリーカラムを用いるナノフローLC－蛍光検出システムを構築した。構築したシステムでは、発蛍光誘導体化した酵母（Saccharomyces serevisiae）並びにヒト細胞（K562）抽出タンパク質試料に対し、1,400分のグラジエント溶離において其其1,300を超えるピークを与えた。一方、LCにおける分離能の向上により近接する多数のタンパク質ピークが発現する為、試料間比較における視認性が低下すると考えられた。この課題解決の為、多タンパク質分離クロマトグラムの比較描写法として、通常のデカルト座標系から円座標系へ変換したクモの巣クロマトグラムを考案した。

UHPLCの技術導入以降、流速を引き上げカラムの圧力損失を増大させて、高速化を図って来た。一方、カラムを伸ばし、高分離化する事も可能である。この場合も圧力損失は増大する傾向にある。こう見ると、分析システムの高圧化は、分離法の高速化にも高分離化にも寄与しそうである。本稿では、圧力損失と高速性、高分離性の3者の性能関係を一目で見る事が出来る3次元グラフについて述べた。それを等高線図で表す事により、最適流速により得られる分離性能から成る直線、及び上限圧力の境界線によって囲まれる三角領域が俯瞰出来た。その三角領域内の性能を獲得する流速とカラム長さの各設定条件は、どれも有用であると考えられた。結果として圧力を増加する事に成る各設定条件が、高速化又は高分離化の性能改良に対しどの程度寄与するのかについて、等高線図が示す丘陵地形の勾配に基づく圧力印加係数を規定する事により、圧力増加分の有効性を定量的に示す事が出来た。

現在、医薬品開発の世界において生体試料中の薬物濃度測定（バイオアナリシス）を対象にした規制文書が多くの国・地域で公示されており、又、間も無く国際的にハーモナイズされたガイドライン（ICH M10）も制定される見通しである。一連の規制文書には適切な生体試料分析を実施する為のナレッジが詰め込まれており、医薬品開発以外の領域でも役に立つ内容に成っている。本稿では、バイオアナリシスの規制内容を理解する為の基礎的な事項を品質試験と対比させて説明する。又、医薬品開発の限定された試験のみに適用されるバイオアナリシスガイドラインを、対象外の試験や医薬品開発以外の領域に活用する為の考え方についても解説したい。

サイズ排除クロマトグラフィー（size exclusion chromatography、SEC）とは、分子サイズを基に分離が行われるHPLCの分離モードの1つであり、主に、高分子化合物の分離分析及び物性評価に用いられている。1964年にJ.Mooreが架橋ポリエチレンゲルを用いて合成高分子の分子量分布を測定した事^1）が始まりであるとされ、現在でも高分子分析における必須の手法である。本稿では、SEC分析に用いる装置構成、分離原理、分子量測定方法、条件設定のコツ等を説明し、併せて、応用例を紹介する。