組織培養研究
Online ISSN : 1881-3704
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29 巻, 2+3+4 号
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論文
  • Ran GAO, Tomoko YAGUCHI, Katsuhisa HORIMOTO, Tetsuro ISHII, Sunil C. K ...
    2010 年 29 巻 2+3+4 号 p. 147-153
    発行日: 2010年
    公開日: 2011/01/27
    ジャーナル フリー
    Mortalin is a member of the Hsp70 family of proteins and exhibits pancytoplasmic distribution pattern in normal and perinuclear in cancer cells. Human cancer cells when induced to senesce by a variety of chemicals and stress conditions show shift in mortalin staining pattern from perinuclear to pancytoplasmic type along with the nuclear translocation and activation of p53 function. Using mortalin staining as a model reporter, we screened human shRNA library for candidates with anticancer activity. Cancer cells were stably transfected with the shRNA expressing plasmids in 96-well plates, immunostained with anti-mortalin antibody and screened for mortalin staining pattern. By four rounds of screening, we have identified nine shRNAs that caused shift in mortalin staining from the perinuclear (cancer cell type) to the pancytoplasmic (normal cell type) pattern. Furthermore, the effect of selected shRNAs was studied on p53 and p16 pathways. Bioinformatics approach revealed the involvement of DNA damage signaling pathway along with NBS1, MRE11 and BRCA1 as candidate targets for anticancer therapy.
  • 蜷川 菜々, 村神 瑠美, 田中 優介, 中川 寛紀, 鳥橋 茂子
    2010 年 29 巻 2+3+4 号 p. 155-165
    発行日: 2010年
    公開日: 2011/01/27
    ジャーナル フリー
    近年、脂肪組織中に間葉系細胞への分化能を有する間葉系幹細胞が見出され、再生医療の観点から注目を集めている。しかし、多くの細胞が混在した脂肪組織中から性質の均一な間葉系幹細胞を高純度で分離収集するのは難しい。一方ES細胞から脂肪細胞へ分化誘導する系がすでに報告されている。そこで、未分化ES細胞から脂肪細胞への誘導過程で間葉系幹細胞が出現することを想定し、これらを単離収集した。さらに収集した細胞が間葉系の細胞への分化能を有するか調べた。マウスES細胞をRetinoic acidとInsulin/T3 で脂肪細胞への分化誘導を行い、間葉系幹細胞の指標であるCD105 を発現する小型の球形細胞をMagnetic Cell Sorting法で単離収集した。集めたCD105 陽性細胞を骨細胞、軟骨細胞、骨格筋細胞、脂肪細胞へそれぞれ分化誘導した。細胞の分化は組織化学および免疫蛍光染色、RT-PCRによる特異的mRNAの発現により検証した。その結果Arizarin Red染色陽性のカルシウム分泌細胞、Alcian Blue陽性の軟骨基質産生細胞、M-Cadherin陽性の筋芽細胞、Oil Red O染色陽性の脂肪滴含有細胞がそれぞれ形成された。RT-PCRの結果もこれを支持した。以上よりマウスES細胞から脂肪細胞への分化過程で分離収集したCD105 陽性細胞は間葉系幹細胞に相当すると考えられた。
  • Aya KASAMATSU, Motonobu SATOH, Touho YOSHIDA, Takuo KOSAKA
    2010 年 29 巻 2+3+4 号 p. 167-172
    発行日: 2010年
    公開日: 2011/01/27
    ジャーナル フリー
    The Health Science Research Resources Bank (HSRRB), the first public human tissue bank in Japan, has been providing human cells prepared from remnant tissues obtained from surgeries performed on Japanese patients to academia and industry under the approval of institutional review board (IRB). HSRRB possesses several lots of fibroblast-like synoviocytes (FLSs) derived from synovial tissues of Japanese patients with rheumatoid arthritis (RA). FLSs are closely related to the pathogenesis of RA. Here we report the quality controls on FLSs revealing the features reflecting RA. We measured the production of matrix metalloproteinase (MMP) -3 and interleukin (IL) -6 in the cells following tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) treatment at protein and mRNA levels using ELISA, Western blotting, and RT-PCR methods. As a result, we found that all lots of FLSs maintained a significant inflammatory response to TNF-α during several passages, suggesting a physiological aspect in RA.
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