電子顕微鏡で生物試料を観察するには,光学顕微鏡とは違つて,標本作製の過程で種々の物理的化学的操作を経なければならないので,artefactの生ずる可能性がある,このようなartefactの少ない標本,つまり試料の生の姿をそのまま観察したいという希望は,この分野での研究者の古くからの念願であり,そのための試みも幾つかあるが,容易に成功の域には達しなかつた.最近になつてこの問題は大きくクローズ・アップされ,広く関心がもたれるようになつてきた.根井は,この目的のために電子顕微鏡学に凍結法を導入し,多年に亘り装置並びに操作に種々の工夫を加えてきた.特に透過型電子顕微鏡による凍結細胞の直接観察を初めて試みたが,本法による観察には限界のあることをみとめた.そこで次の手段として走査型電子顕微鏡による凍結試料の直接観察をねらい,これが可能であることをみとめた上,さらに,凍結破断を行なうことにより,試料内部の断面観察にも成功したので,その方法および結果を報告する.

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1.真空制御(コンダクタンス法)による真空度の任意曲線プログラムの制御については,満足する結果をえた.この方式により大型,小型にかかわらず真空度を昇華期の最大負荷時から,充分小さい最終含水率の乾燥終点まで一貫して制御できる確信をえた.2.温度,真空度の両者を正確にそろえた場合,被乾媒体の乾燥時間と最終含水率などの品質を一定にしうるか,についてはひき続き実験中であるが,1次乾燥中の経過に関するかぎり,肯定的結果をえた.3.工学的な見地からみて極めて重要な影響をもつにもかかわらず,信頼できるデータの少い,熱板-トレイ,トレイ〜バイアルなど軽接触面の熱伝達係数について,既発表データ(前掲)の有効性を確めた.本装置の設計・製作・測定およびデータの解析について,ならびに薬液の量産的凍結乾燥過程の問題点の討議にもとずく研究試験の全体的企画には,藤沢薬品および共和真空の各分野の方々が多数ご参加下さった.深く謝意を表する.

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The ability of pollen to withstand freezing and freeze-drying is dependent on the interaction of a large number of variables such as freezing rate, thawing rate, freeze-drying temperature and duration, storage temperature and environment and rehyeration rates. A change in any of these variables will most likely affect the others directly Freezing of pollen at rates of approximately 200℃/min maintains the highest degree of viable pollen when combined with rapid thawing or freeze-drying. These results suggest that freezable water enucleates within the cells and grows during subsequent slow rewarming into larger ice masses. However, Davies and Dickinson (Plant Physiol., 24 5-9, 1971) maintain that pollen has a normal water content of 9-10% and also a high sucrose concentration which makes it unlikely that intracellular freezing occurs. Although Dickinson makes no statement of freezing rates, immersion in dry ice and acetone baths at -60℃ to -70℃ might suggest a freezing rate rapid enough to produce minute ice crystals.

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細菌に各種の物理的処理を加えると,一部の菌に非致死的損傷を生じ,不適当な培養条件では増殖できない.一方,菌株保存の立場では,細菌を凍結または乾燥保存したとき,損傷菌を含めて,できるだけ多くの生菌を目収しなければならない.従来から,ある種のペプチドは,損傷菌を正常状態に戻す回復活性を示すことが知られている.本報では,凍結損傷菌に対する各種ペプトンの回復効果を期待して実験を開始し,結果的には,一部ペプトンが損傷菌の増殖を著しく阻害する場合があることを明らかにした.

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酵母菌の4菌株を用い,凍結乾燥および真空乾燥の遺伝的効果について調べた.ade_1/+(4000)あるいはade_2/+(X2447)からアデニン要求性変異が比較的容易に誘発された.leu_<1-12>/leu_<1-1> (XS1473)からロイシン非要求への復帰変異および半数体野性株(S 288C)のカナバニン耐性変異はほとんど誘発されなかった.X2447のアデニン要求性変異率は凍結乾燥時間とともに増大した.

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哺乳動物の細詣では,ある適当な冷却速度で凍結したときに,融解後の生残率が最も高く,それより冷却速度が大きくても小さくても,生残率の低くなることが多い.ヒト赤血球では,その山が10^3℃/min付近にあり,生理食塩水浮遊液で70%くらいの溶血率を示した.ただし,これは急速融解を行なつたばあいであって,加温過程の温度によって溶血が増し,-30℃ですでに100%に達した.この溶血率の増加は,塩害で説明するには温度が低すぎるので形態的変化からこれを検討したが,妥当な根拠は見出せなかった(昨年の本研究会発表).今回はさらに,グリセリンを添加したばあいの急速凍結赤血球の加温過程の吟味を行なったので,その結果について報告する.

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我々は過去1年間に癌前駆症(3例),原発性皮膚癌(有棘細胞癌2例),転移性皮膚癌(3例),再発性肛門癌(1例)の計9例に凍結外科を施行,その内原発性皮膚癌の2症例については昨年の本研究会に於て発表済みなので,他の7例について報告する.

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