凍結および乾燥研究会会誌

獣医学領域においては広く細菌菌株の凍結乾燥保存が実用に供されているが,保存の基礎的な問題,例えば供試細菌と保護物質の選択との関係については十分な知見がない.著者らは獣医学領域の病原細菌の保存をより効果的なものとするために,乾燥及び保存過程における保護物質の比較検討を行った.今回は凍結乾燥が容易であるグラム陰性桿菌のSalmonella pullorumと,比較的困難な菌種のMycoplasma及びCampylobacter ferusを用い,凍結乾燥過程並びに保存過程における生菌数と保護物質との関係をしらべた.

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一般に糸状菌類の胞子,とくに不完全世代の分生子は形態が多種多様であり,形態により凍結や乾燥に対して感受性の異なることが予測される.しかし実際にはある種の胞子型,例えばtetraradiate型やhelicoid型の分生子,またはPhytophthora, Acremoniellaなどのような大型薄膜の分生子などで耐性の乏しいものがあるが,とくに形態と感受性に強い相関が認められない.むしろ凍結や乾燥による保存が困難な場合の多くは,胞子を全く形成しないものや形成量の少ないもの,本来発芽が希にしか起らないもの,あるいは鋸菌類のようにcold induced dormancyが起ることで見かけ上感受性となるもの,などである.Ustilago, Doassansia, Graphiolaなどの黒穂菌類,Exobasidium(もち病菌)などの担子菌類,Taphrinaのような子のう菌類は,自然界で見られる胞子型は雑菌汚染が著しく純粋培養ではこれら胞子型は再現できないが,培地上でほぼすべての栄養体がyeast-likeの無性胞子となり,しかも乾燥や凍結に対する耐性がきわめて高いので保存が容易である.L乾燥では3〜5年後でも生残率がきわめて高いことが確認されている.本来発芽が希な菌類や胞子形成の見られない菌類については,発芽方法や胞子形成方法の検討が先決であり,鏡菌類についてはheat shockによりcold induced dormancyを打破できることがすでに知られているので,当面の問題点は胞子形成量の少ない菌株について,いかにこれを多くするかということであろう.ここでは植物寄生性Fusarium菌16株(4種12分化型)についてL乾燥による保存を試み,保存による生残菌数の変化を分生子形成量との関連において検討した.

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酵母を保存するのに,流動パラフィン重層法のほかに凍結乾燥法も試みてきた.凍結乾燥をした酵母を10〜18℃に保存したときSchizosaccharomycesは17年間生存していたが,他の属のもののなかには凍結乾燥直後に死滅しているものもあった.この原因を追求するため,比較的凍結乾燥が困難だとされているBrettanomycesとのSporobolomycesを供試菌として用い,培養条件と凍結乾燥後の生残率をみた.その結果酸生成は生残率に関係がなく,偽菌糸をつくり易いものは死滅し易いことを認めた.そこで偽菌糸をつくり易い菌株でも安全に保存することを日的として,主として凍結条件を検討した.

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微生物細胞を化学的処理して得られるL型変異菌は,細胞壁を失い原株とはかなり異った性質をもつようになる.一方動物性細胞は本来細胞壁をもたず,一般に微生物細胞に比較して凍結に対する抵抗性は弱い.そこでL型菌を一つのモデルとして利用し,原株と比較することによって動物性細胞の凍結機構を明らかにしようと試みた.

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