臨床化学

Lipoprotein (a) の臨床的意義

山村卓, 野村秀一, 山本章

1991 年 20 巻 4 号 p. 177-184
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_177

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Lipoprotein(a)の測定方法〔I〕

抗体作製とELISA測定法

安部彰

1991 年 20 巻 4 号 p. 185-192
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_185

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Lipoprotein (a) の測定方法〔II〕

免疫比濁法とラテックス凝集比濁法

藤田誠一, 片山善章, 佐野隆宏, 松山辰男, 浦田武義

1991 年 20 巻 4 号 p. 193-202
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_193

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Leukotoxin Synthesis and Its Effects on Blood Pressure of Guinea Pigs

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1991 年 20 巻 4 号 p. 203-209
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_203

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This study investigates the chemical synthesis and physiological activities of leukotoxin (9: 10-epoxy-12-octadecenoic acid), a toxic substance known to occur naturally in polymorphonuclear leukocytes. The leukotoxin used in this study was synthesized from linoleic acid with peracetic acid and was separated from the side product of this synthesis (an isomer of leukotoxin, 12: 13-epoxy-9-octadecenoic acid) by thin layer chromatography and high performance liquid chromatography. The chemical structure of the leukotoxin was confirmed by gas chromatography-mass spectrometry. In order to examine the physiological effects of leukotoxin, this fatty acid was injected into guinea pigs. The leukotoxin initially increased blood pressure and eventually caused cardiac arrest. The results of this preliminary study indicate that leukotoxin synthesized via the above method is physiologically active and can be used for experiments investigating toxic and/or physiological effects of leukotoxin.

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Dithiothreitol前処理によるCA125酵素免疫測定法における偽陽性の回避法

川上圭子, 塚田敏彦, 中山年正, 北村元仕

1991 年 20 巻 4 号 p. 210-216
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_210

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卵巣癌関連マーカーであるCA125の酵素免疫測定法 (EIA) による測定にはlgM様物質に由来する偽陽性反応が見られる。その回避法として dithiothreitol (DTT) を用いた検体前処理法を開発した。
本法による測定値はラジオイムノアッセイ (RIA) 法値と良く相関し, 少なくとも本法値がRIA法値より明らかな高値となる例は無くなった。平方, 従来のEIA法と本法とでは日常の血清検体 20641件中解離検体が37件 (0.18%) 見い出された。解離検体を抗lgMで吸収すると本法値に近似した値へ低下し, また血清を高速液体クロマトグラフィ (HPLC) ゲルろ過でCA125のEIA活性を示す分画の分子サイズを求めると解離検体では約1000KダルトンでlgMと重なり, 非解離検体では約2000Kダルトンであった。これらのことから解離検体の大部分がlgMに関連することが確認された。

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家族性高アリルアミダーゼ血症の検討

徳永賢治, 宍野宏治, 越智正昭, 菅野和久, 村瀬光春, 佐伯修一, 武内望

1991 年 20 巻 4 号 p. 217-222
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_217

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家族性高アリルアミダ-ゼ血症について検討した。アリルアミダーゼ (AA) は2症例とも分子量, Km値は正常ヒト血清AAと比較して差がなかった。しかし耐熱性においては, 本症例AAがやや安定であった。糖鎖構造については, ノイラミニダーゼおよび小麦胚芽レクチン (WGA) 処理により検討した。ノイラミニダーゼ処理では正常ヒト血清AAと異なり移動度が大きく減少し, シアル酸を含有していることが示唆された。WGA処理では3分画に分離され, 主分画は正常ヒト血清AAに比し移動度がわずかに減少していた。これらの結果より本症例は, 糖鎖の付加する過程で異常が生じ正常人と異なった糖鎖をもつAAが出現し, 代謝過程においてクリアランスが低下して酵素活性が上昇したものと考えられた。

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組換え顆粒球コロニー刺激因子 (KW-2228) の開発研究

酵素免疫測定法による抗KW平2228抗体および抗大腸菌タンパク質抗体測定法の開発

土谷昭浩, 森田収, 桑原隆, 奥村修造, 小林智, 山崎基生, 横尾義春

1991 年 20 巻 4 号 p. 223-229
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_223

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遺張子組換えG-CSF (KW-2228) 製剤を投与したときに血清中に産生される可能性のある抗 KW-2228抗体および抗大腸菌タンパク質 (ECP) 抗体の測定法として, enzyme-linked immunosorbent assay法を確立した。
本法は, マイクロプレートに抗原を吸着させたものを固相とし, 標識体にはペルオキシダ-ゼで標識したプロテインAを用いる間接法である。本法により, KW-2228を投与したサルの血清抗体価を測定したところ, 投与後産生された抗KW-2228抗体が検出された。正常人15例に対する単回投与試験では, 抗KW-2228抗体価はすべて陰性であった。ヒトの抗ECP抗体価はすべて陽性であったが, 投与前後で抗体価の経時的変動はなく, 正常人血清中にはECPに対する抗体の存在することが示唆された。本法は, 高感度で精度が高く, 特異性に優れ, KW-2228製剤投与後の抗体産生の確認法として有用と考えられた。

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アルデヒドデヒドロゲナーゼ2欠損症の非RI法による迅速な遺伝型診断

向出雅一, 川口龍二, 引地一昌

1991 年 20 巻 4 号 p. 230-234
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_230

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アルコール性肝疾患のリスクマーカーとしてのアルデヒドデヒドロゲナ平ゼ (ALDH2) 遺伝子型の direct chemiluminesenceを用いた高感度で簡便な測定系を確立した。ビオチン標識プロ-ブ, 温度勾配competitive dot blot hybridization, 3-(2'-spiroadamantane). 4-metoxy-(3'-phosphoryloxy) phenyl-1, 2-dioxetane (AMPPD) 1, 2) を用いた。検出感度は末楕血DNA6.25ngであった。日本人のアルコ平ル性肝疾患例, および, 健常コントロールに対するALDH2の遺伝子解析を行った結果, 前者では正常型ホモ接合体が大部分 (正常型遺伝子頻度=0.95) で, ヘテロおよび変異型ホモ接合体はアルコール性肝疾患に対するリスクが低いことが示された。本測定系は, RI管理区域を必要とせず日常検査として平般の検査室に導入可能であると同時に他の遺伝子の点突然変異鋤の検出に応用が期待される。

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A New Method for Measuring Serum Pyruvate Kinase and Creatine Kinase Activities Using a Thermostable Glucokinase

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1991 年 20 巻 4 号 p. 235-241
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_235

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A new method for measuring the activity of serum pyruvate kinase (PK: EC2. 7. 1. 40) was developed by using a thermostable glucokinase (Glck) from a thermophilic bacterium, Bacillus stearothermophilus. The ATP formed by the reaction of PK is finally converted to NADPH via glucose-6-phosphate by the action of Glck and glucose-6-phosphate dehydrogenase. The change in absorbance at 340nm was found to be linear up to about 5000U/I of PK. The within-run and day-to-day coefficients of variation were1.13% at 85.4U/l and 2.08% at 45.7U/l, respectively. The influence of various coexistents and anticoagulants, such as bilirubin, ascorbate, glucose, EDTA, sodium fluoride, etc., on the assay was negligible. The reagent was stable in solution for about one month at 10°.
A method for simultaneously measuring the activities of PK and creatine kinase (CK) in a single specimen was also developed. This was based on the fact that the assay conditions for both enzymes were similar. This method was found to have a high degree of precision and a good correlation with respective PK and CK assay methods. This simultaneous measurement may be useful for the accurate differential diagnosis of myocardial infarction.

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High-Performance Liquid Chromatography of Estrogen 3-Sulfates with Electrochemical Detection Using an Immobilized Enzyme Reactor

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1991 年 20 巻 4 号 p. 242-246
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_242

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A simple and sensitive method for the determination of estrogen 3-sulfates by highperformance liquid chromatography with electrochemical detection is described. The sulfates were separated on a reversed-phase column and subsequently hydrolyzed with an immobilized sulfatase reactor in a continuous flow mode. Estrogens liberated were then detected with a coulometric detector. A linear response was observed for four sulfates, estrone sulfate, 16 a -hydroxyestrone 3-sulfate, estradiol 3-sulfate and estriol 3-sulfate in the range 25-1000 ng as an injected amount. The detection limits (S/N=10) were 20 ng for estriol 3-sulfate and 16 a -hydroxyestrone 3-sulfate, and 50 ng for estrone sulfate and estradiol 3-sulfate, respectively.

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血清グルコース測定勧告法

1991 年 20 巻 4 号 p. 247-254
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_247

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臨床検査薬のラベル表示に関する指針

1991 年 20 巻 4 号 p. 255-259
発行日: 1991/12/31
公開日: 2012/11/27

DOIhttps://doi.org/10.14921/jscc1971b.20.4_255

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