真菌の中には比較的低い水分活性,温度,pH条件下において生育可能な菌種も多く,穀類,各種乾燥食品,半生菓子,漬物類などの比較的保存性に優れた食品の変質原因菌として問題視されている.特に,穀類や種実類などの農作物は,生産・収穫・乾燥・保管・流通の各段階で常に真菌汚染の危険にさらされており,増殖に伴う変質・変敗や品質の低下のみならずマイコトキシン汚染を伴っていることもまれではない.一方,近年,食品製造技術や包装技術の急速な進歩と低温流通システムの普及により一部の加工食品の保存性と安全性は著しく増大した.しかし,その反面,消費者の嗜好の変化による食品の低塩・低糖化,保存料の使用を忌避する傾向などから,むしろ微生物危害の危険性が増加した食品も少なくない. ここでは,著者らがこれまでに実施した市販食品の真菌およびマイコトキシン汚染調査結果を概説するとともに,真菌の増殖に起因する市販食品の苦情事例についても述べたい.

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あるサンプル中の含有成分を検索する場合,測定する目的物質が既知化合物の場合には化学的なアッセイが可能でマイコトキシンに関してもTLC法,HPLC法,アフィニティクロマト法,イムノアッセイ法等優れた方法が開発され数多く報告されている.一方,測定する対象が未知物質であったり特定の化合物に限定されない時は選定するための何らかの基準が必要で,活性物質を対象とする場合にはバイオアッセイが有効な手段となる.種類と状態によって異なるが,通常マイコトキシン検索の対象試料に付着する真菌類の菌数は,食品の場合10³ ～10⁴個/g,香辛料,生薬原料の場合10⁴～10⁵,時には10⁷個を数えることが報告されている.これらを構成する菌種は,置かれている環境の変化に伴いmicrofloraの変遷があるものの,100～200種が検出される.同一種の菌であっても,株によっては全く異なる代謝産物を生成することが多いため,検索すべきサンプル量は膨大になる.このような大量のサンプルからマイコトキシンを検出するために,効果的かつ迅速なスクリーニング法が必要で各種の研究がなされている. 本報告においては,我々が試みたバイオアッセイ及び化学的検討について報告する.なお,本発表の菌学的検討は宇田川俊一(東京農業大学),バイオアッセイについては梅田誠(横浜市立大学・医学部),梅原薫(静岡県立大学・薬学部),土屋利江(国立衛生試験所),aflatoxin(AF)検出は田中敏嗣ら(神戸市環境保健研究所)との共同研究である.

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振頗性(tremorgenic)マイコトキシン(トレモルゲン)の研究は1964年のaflatrem(1)の発見に始まるといわれている.その後,1の他にpenitrem類,janthitrem類,paspalinine類,paxilline, verruculogen類,territrem類,fumitremorgin類,それにtryptoquivaline類などが報告され,現在では30種類以上の物質が知られている.また,territrem類,verruculotoxin, verrucosidinを除けば,ほぼすべての化合物がインドール関連化合物であり,それらはジケトピペラジン類,トリプトキバリン類とインドロジテルペン類に分類できる.そのうちの,インドロジテルペン類について以下に述べる.

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環境中,特に土壌に存在するAspergillus flavus,A.parasiticusの評価は落花生,トウモロコシをはじめとする各種農作物のアフラトキシソ(AF)汚染の制御を含めて重要な意義を持つので適確な評価が求められている. 我国では国内各地の農作物栽培土壌におけるA.flavusの分布について,すでに鶴田・真鍋,高鳥ら,真鍋ら,高橋,Okazakiらにより報告されていて,九州南部や沖縄地方の土壌を除いてAF生産能を有する菌株は少ないとされている. 著者らはかねてA.flavusの食品中よりの選択的分離・同定培地としてのAspergillus Flavus/Parasiticus Agar(AFPA)の有用性を報告した.今回は国内では例外的にAF生産菌を含むA.flavus, A. parasiticusが多いとされた南西諸島の畑地土壌とその土壌中に存在する植物残査を対象にAFPA培地などを用いたA.flavus, A.parasiticusの選択的分離を検討したので報告する.

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Aspergillus flavus var. parvisclerotigenus var. nov., for some isolates from soils in maize fields in Thailand, is described and illustrated. It is characterized by the formation of abundant sclerotia smaller than those of A. flavus var. flavus. All of the isolates were identified with the remarkable producers of aflatoxins.

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The production of aflatoxins (AFs) by Aspergillus parasiticus NRRL 2999 attained maximum 144 hr after inoculation and the incubation time was used for subsequent experiment. AF producibility of 34 strains belonging to A . oryzae and A. sojae were inspected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and high performance liquid chromatography (HPLC). All 34 strains did not produce AFs. On the other hand, the presence of AFs-like material was confirmed by HPLC, and its retention time was similar to but different from that of AF B₂. The AFs-like material was not detected by ELISA.

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A simple and rapid method is described for the determination of aflatoxin (AF) B₁ in mixed feeds. AF B₁ is extracted with a mixture of chloroform-0.1 N hydrochloric acid. The extract is cleaned up by using a Sep-Pak Florisil cartridge. AF B₁ is determined by high performance liquid chromatography (HPLC), using a μPorasil column, a fluorescence detector, and a mobile phase of toluene-ethyl acetate-formic acid-methanol (89+7.5+2+1.5). The mean recoveries of AF B₁ spiked at levels from 10 to 40 ng/g in mixed feeds are in the range of 94.2∼102.9%.

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A total of 72 strains of bacteria, isolated from commercial “Kimchi”, both retailed in Seoul (Korea) and Koriyama (Japan), were assayed for their antifungal activity against three mycotoxin-producing fungi: Aspergillus flavus, Fusarium nivale and Penicillium islandicum. As a result, the 55 strains showed the antifungal activity, and they were classified into two types: one was shown as inhibition for mycelial growth of the three fungi, and another as inhibition for sporulation of A. flavus.

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