生物物理化学
Online ISSN : 1349-9785
Print ISSN : 0031-9082
ISSN-L : 0031-9082
43 巻, 1 号
選択された号の論文の8件中1~8を表示しています
  • PCR (polymerase chain reaction) 法, ミスマッチPCR法
    須藤 加代子, 前川 真人
    1999 年 43 巻 1 号 p. 1-7
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    Rapid progress in the molecular technology has stimulated attempts to establish genetic diagnosis of human disease. Practical use of DNA amplification method proved to be very useful in genetical analysis. Polymerase chain reaction (PCR) is one of the most popular method for DNA amplification technology. There are some point mutations which can be detected by the restriction endonuclease digestion of amplified DNA. Such technology is generally called as PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism). However, some mutations do not effect on recognition sites of any restriction endonucleases. In those cases, a new primer can be designed to create any recognition sites. The primer and PCR using the primer are called as mismatched primer and mismatched PCR, respectively. Before and after restriction endonuclease digestion of amplified DNA, they are electrophoresed on agarose gel or polyacrylamide gel to distinguish the cleaved bands. It is important to confirm that the amplified DNAs do only contain the target DNA, without non-specific DNAs. Electrophoretic methods are useful for this purpose. In this experimental protocol we describe the procedures for PCR techniques, restriction endonuclease digestion, and mismatched PCR. Also we describe some examples using these procedures to detect genetic mutations in lactate dehydrogenase and serum cholinesterase genes.
  • 上田 昌伺, 真柴 新一, 内田 壱夫
    1999 年 43 巻 1 号 p. 9-12
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    キャピラリー電気泳動法により血中アラントイン濃度を測定した. キャピラリー電気泳動はフューズドシリカ (75μm×50cm) をキャピラリー管に用い, 泳動溶液には50mM Na2B4O7-HCl緩衝液pH9.0を用いて, 25kVで泳動し, 検出は214nmで行った. アラントイン濃度2~400μMでのピーク面積との相関係数は0.999であった. また, CVは10%以下であり, 添加回収率は92~113%であった. 安定性の検討では, 光照射によるアラントイン濃度の増加が認められた. 健常者においてはアラントインは1例を除いて検出されなかったが, リウマチ患者においては健常者と比較して有意に高値を示した. キャピラリー電気泳動法は血中アラントインの測定法として有用と考えられる.
  • 田口 隆彦, 藤田 敬子, 千秋 達雄, 大橋 望彦
    1999 年 43 巻 1 号 p. 13-16
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    A method for an ultrasensitive silver-based color staining of proteins described by Sammons et al. was applied to the detection of oligonucleotides on polyacrylamide gels with slight modifications in the method of fixation. With these modifications, we can stain even tetranucleotide bands such as dA4. Furthermore, the sensitivity of staining of Hae III fragments of φX 174 RF DNA is several times higher than with ethydium bromide staining. The sensitivity of this silver-staining differs markedly among various homo-oligonucleotides. The limit of detection of rA10 or dA10 is approximately 40pg per mm2 of cross-sectional area. Homo-oligonucleotides, dG10 and dC10, are also detectable. However, the dT10 band concentrated more than 1, 000-fold could not be detected on the polyacrylamide gel by silver staining. Thus, the silver staining method is very useful for the sensitive detection of oligonucleotides as short as tetranucleotides that are not stained by ethidium bromide.
  • 中津 雅美, 新井 雅信, 桐生 加代子, 冨樫 明子, 芝 紀代子
    1999 年 43 巻 1 号 p. 17-21
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    多くの多発性硬化症(MS)患者髄液に見られるオリゴクローナルIgGバンド (OGB) の検出法を検討した. アガロース電気泳動法とブロッティング法を用い, 2, 3の工夫を加えることで, 髄液中のOGBの検出可能となる条件を設定した. 第一は泳動後のゲルをブロッティング緩衝液に平衡化する操作を省略した. 第二にアルカリフォスファターゼの発色液はBCIPとNBTを適切な割合で使用することで染色感度を高められた. 本法は, 免疫固定法と比較して約30倍の検出感度が得られた. 本法を臨床応用し, MS 8例を含む83例中, 本法では11例 (MS 8例, MS疑い2例, ウイルス性脳炎1例) がOGB陽性であったが, 25倍濃縮した髄液を用いる免疫固定法では4例 (MS) が陽性, 4例 (MS 2例, MS疑い2例) が疑陽性であった. 本法は未濃縮髄液のOGBのスクリーニングに有用な方法と考えられた.
  • 戸田 年総, 森 真由美
    1999 年 43 巻 1 号 p. 23-26
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    Abnormal IgA molecule, which lacked in disulfide bridges between α chains, was detected from the sera of patients of monoclonal IgA gammopathy with albuminuria by the method of urea-SDS-PAGE performed in the reducing-agent-free condition. Throughout the procedure, protein in the specimen was kept away from any reducing agent to avoid an artificial production of half molecules during the experiment. A band of 80kDa protein, which showed immunoreactivity to both anti-α- and anti-λ-chain antibodies, was detected in sera from four patients of monoclonal IgA gammopathy accompanied with albuminuria. The molecular mass and the immunoreactivity indicated that the 80kDa protein was so-called“IgA half molecule”(α1λ1). The band of α1λ1 molecule was faint on the gel in the specimens from patients of no albuminuria. The abnormal α1λ1 molecule was eluted from the column of gel permeation chromatography into fractions corresponding to 320kDa when it was performed using urea-free buffer. The chromatographic behavior suggested the non-covalent interaction between the abnormal α1λ1 molecules in the non-denaturing buffer condition.
  • 大谷 慎一, 大谷 英樹
    1999 年 43 巻 1 号 p. 27-30
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    We have developed a latex agglutination immunoassay method for free light chains of immunoglobulins in urine and clarified its clinical significance. Bence Jones protein, which was qualitatively detected in urine with the traditional immunoelectrophoresis, could be quantitatively determined by this method. The free light chain determination was useful for diagnosis and prognosis of multiple myeloma that is associated with monoclonal free light chains. The increase in monoclonal free light chains in urine was found in patients with primary macroglobulinemia, primary amyloidosis, and systemic lupus erythematosus. These results suggest that free light chains in urine are important markers for multiple myeloma and related diseases in clinical practice.
  • 佐藤 広顕, 渡部 俊弘, 相根 義昌, 高野 克己
    1999 年 43 巻 1 号 p. 31-38
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    我々はキャベツから, アセトン沈殿, Octyl-Sepharose CL-4Bカラム疎水クロマトグラフィーおよび Mono-Qカラム陰イオン交換クロマトグラフィーにより, Phospholipase D (PLase D) を精製した. 精製された PLase Dは, SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動 (SDS-PAGE) により均一であった. 精製されたPLase DのN末端および内部アミノ酸列が分析された. これらのアミノ酸配列をもとに, 次のような結論が得られた. (1)精製されたPLase Dの分子量は, SDS-PAGEにより, 約87kDaと推定された. (2)SDS-PAGE上で1つのバンドとして現れた精製PLase Dタンパク質バンドは, N末端の開始位置が少しずつ異なる3つのタンパク質を含んでいた. (3)精製されたPLase DおよびV8プロテアーゼやリシルエンドペプチダーゼによって限定分解された断片のN末端アミノ酸配列は, 米糠, トウモロコシ, およびヒマのPLase D cDNAから推定されたアミノ酸配列と比較された. その結果, キャベツ起源PLase Dの一次構造は他の植物起源のPLase Dのそれと類似していることが明らかとなった.
  • 星野 忠, 熊坂 一成, 河野 均也, 菰田 二一
    1999 年 43 巻 1 号 p. 39-42
    発行日: 1999/03/15
    公開日: 2009/03/31
    ジャーナル フリー
    The age-depended levels of creatine kinase (CK) isoenzymes in 544 juvenile outpatients and 37 healthy adults were evaluated by CK isoenzyme analysis with cellulose acetate membrane electrophoresis. From the results, the age-depended levels of CK-MM activities were relatively low in the tested all subjects. Further, higher activities of CK-BB and CK-MB were depended on younger juveniles. In contrast, mitochondrial CK (m-CK) was detected in 511 (93.9%) of the tested 544 juveniles and in all of the tested 37 healthy adults. In addition, higher levels of m-CK were found in the tested all age groups, compared with those levels of CK-BB and CK-MB.
feedback
Top